黃蜀葵總黃酮治療腦缺血引起的腦梗塞和中風后遺癥（膠囊）和口腔潰瘍（散劑）

藥學研究

藥材來源及鑒定依據：本藥材為錦葵科秋葵屬植物黃蜀葵Abelmoschus Manihot （L.）Medic的干燥花, 藥材名稱、漢語拼音、藥材拉丁名分別為: 黃蜀葵花、Huangshukuihua、Corolla Abelmoschi。 因該藥材收載于江蘇省中藥材標(1989年版) 增補本,根據藥品注冊管理辦法(試行)規定,可以免報資料9、10、11。該藥材現農民可大量種植，江蘇省興化市種植已經形成規模，可根據需要，產量不受限制。

通過植物化學成分預試，表明制劑中間體和膠囊中均含有黃酮、黃酮苷、鞣質等化學成分，黃蜀葵花總黃酮的HPLC圖譜及各峰的UV光譜顯示12個黃酮成分,現已從中提取分離8個黃酮成分，經光譜分析，衍生物制備、酸水解以及理化常數的測定，分別鑒定為槲皮素-3-洋槐糖苷、槲皮素-3ˊ-葡萄糖苷、金絲桃苷、楊梅素、槲皮素、棉皮素-3ˊ-葡萄糖苷、異槲皮苷及棉皮素。該8個黃酮成分含量約占總黃酮含量的85%以上。

主要研究的含量測定項，總黃酮的含量測定，以蘆丁為對照品，用NaNO2   ,Al(NO3)3  顯色，在510nm處測定吸收度，總黃酮制劑也同法測定，比較，計算即得，規定本品中間體含總黃酮以蘆丁計不得少于50%，制劑每粒不得少于25mg；同時用HPLC法測定總黃酮中金絲桃苷的含量，規定本品中間體含金絲桃苷不得少于14.5%，制劑每粒不得少于7.25mg 。

該質量標準含量測定項分別以蘆丁比色法測定總黃酮的含量，用HPLC法測定金絲桃苷含量，該方法快速、準確，質量便于控制。

治療腦血管藥理、毒理研究

一、藥理學研究結果：

在大鼠大腦中動脈結扎模型（MCAO）上，與銀杏葉提取物（EGB）一樣，黃蜀葵花總黃酮（TFA）在25 ～ 100 mg·kg-1（ig）范圍內，能顯著減輕腦組織梗塞重量,并呈一定的量效關系，100 mg·kg-1  TFA可顯著抑制缺血腦組織中LDH活性的下降，25、50、100 mg·kg-1  TFA還能顯著抑制MCAO大鼠腦組織中NO含量的降低；在雙側頸總動脈結扎致大鼠不完全性腦缺血模型上， 50、100 mg·kg-1  TFA(ig)可顯著抑制腦水腫的發生；在小鼠斷頭后張口喘氣模型上，20、40、80 mg·kg-1  TFA(ig)可明顯延長小鼠斷頭后張口喘氣的時間。另外，20、40、80 mg·kg-1  TFA(ig)可明顯延長夾閉氣管后小鼠ECG持續的時間；15 、30 mg·kg-1  TFA(ig)能顯著增加給藥45 min時狗頸內動脈的血流量，并同時降低狗腦血管外周阻力；TFA（0.025、0.050、0.100 mg·ml-1）能顯著抑制膠原（Coll）誘發的家兔血小板的聚集反應，并且50、100 mg·kg-1 TFA(ig)可明顯降低大鼠頸總動脈-靜脈旁路模型中血栓的濕重。以上實驗結果表明TFA有抗腦缺血作用，其作用可能與增加腦血流量及降低腦血管外周阻力、抗血小板聚集和抑制血栓形成有關。

二、一般藥理學研究結果：

TFA的一般藥理學研究結果表明：小鼠ig TFA 125、250、500 mg·kg-1  5h內未觀察到一般行為指標發生明顯改變，也未見小鼠自發活動有明顯變化；狗ig 100、200、400 mg·kg-1  TFA 5h內，未見血壓、心率、心律、呼吸頻率及潮氣量出現明顯變化，100、200、400 mg·kg-1 TFA對狗心電圖（ECG）無明顯不良影響。表明TFA （ig）對小鼠精神神經系統無明顯影響；對狗呼吸系統、心血管系統也無明顯不良影響。

三、小鼠急性毒性試驗結果：

TFA 20000 mg·kg-1 灌胃給藥，2周（W）內未見小鼠出現明顯毒性反應，也未見死亡，表明灌胃給藥,TFA LD50大于20000 mg·kg-1；腹腔注射TFA LD50為2420.3±199.8 mg·kg-1，95% 可信區限為2229.1 ～ 2627.9 mg·kg-1。

四、大鼠長期毒性試驗結果：

大鼠連續15 W灌胃給予TFA 150、300、600mg·kg-1，在試驗給藥期間和停藥恢復觀察期間均未見大鼠出現明顯的中毒癥狀，其攝食、體重增長與對照組比較無明顯差異，主要臟器的臟器系數和組織病理學檢查與對照組比較無明顯差異；血液學檢查和血液生化學檢查中只有用藥15W時中劑量組的血紅蛋白（HGB）和大、小劑量組血糖（GLU）有明顯降低，其它指標無異常變化；停藥恢復期間僅見TFA大劑量組的丙氨酸氨基轉移酶（ALT）和總膽固醇（TCH）增高明顯，但未見有其它新的毒性反應發生。

五、比格狗長期毒性試驗結果：

比格狗連續15 W灌胃給予TFA 50.0、122.5、300.0mg·kg-1，在試驗給藥期間和停藥恢復觀察期間，僅見在給藥2 ～   3 W時大劑量組部分動物出現一過性的惡心、嘔吐反應，其它動物無明顯中毒癥狀出現；對動物的攝食、體重增長、ECG、血液學檢查、血液生化學檢查及主要臟器的臟器系數等指標與無明顯不利影響；各劑量組的病理組織學檢查結果與對照組比較無顯著性差異。此研究結果表明連續15 W灌胃給予TFA無明顯毒性作用，停藥觀察15天也未見新的毒性作用出現。

綜上所述，TFA對缺血性腦損傷有較好的保護作用，其作用可能與增加腦血流量、抗血小板聚集和抑制血栓形成有關；一般藥理作用研究表明對小鼠精神神經系統和狗呼吸系統、心血管系統無明顯不良影響；小鼠灌胃給藥，LD50大于20000 mg·kg-1；長期毒性試驗研究結果提示臨床研究時注意對肝功能和血脂的變化的觀察。

一個好的抗腦缺血藥，應具有增加腦血流量，阻斷腦缺血后腦細胞Ca2+內流，抗自由基和抑制NO生成等作用。黃蜀葵花總黃酮膠囊劑中含量較高的為槲皮素及其糖苷即金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3′-葡萄糖苷及槲皮素[5、6] 。文獻報道從黃蜀葵花總黃酮中提取分離的金絲桃苷和槲皮素等均有增加腦血流量，阻斷腦缺血后腦細胞Ca2+內流，抗自由基和抑制NO生成等藥理作用[1-4] 。而且急性毒性試驗表明小鼠灌胃給藥黃蜀葵花總黃酮20g????????Kg-1未見小鼠出現明顯毒性反應，表明其LD50>20g????????Kg-1，提示毒性較低，因此黃蜀葵花總黃酮為一理想治療腦缺血藥。

治療口腔潰瘍藥理、毒理研究

一、一般藥理學：本研究在參照文獻的基礎上，用30%冰醋酸誘發家兔口腔粘膜潰瘍，將黃蜀葵花總黃酮原料藥（TFA）6.25、12.5mg和50mg和黃蜀葵花總黃酮散（噴劑）（TFAZ）12.5mg、25mg和50mg涂在或噴在家兔口腔粘膜潰瘍處可顯著抑制冰醋酸誘發的家兔口腔粘膜潰瘍的炎癥、充血等反應，并明顯縮小家兔口腔粘膜潰瘍面積，也顯著改善家兔口腔粘膜潰瘍病理學改變。結果表明TFA和TFAZ對家兔口腔粘膜潰瘍均有明顯的治療作用。

本研究表明在小鼠扭體模型上， 灌胃（ig） 黃蜀葵花總黃酮（TFA）在70 — 280 mg.kg-1范圍內可呈劑量依賴性抑制AA致小鼠的扭體反應，腹腔注射（ip） TFA 5、10、20 mg.kg-1也可顯著抑制小鼠扭體反應；在福爾馬林模型上，ig TFA 140、280 mg·kg-1對可顯著抑制福爾馬林致小鼠疼痛的Ⅰ、Ⅱ相反應，結果表明TFA有明顯的鎮痛作用。并且在福爾馬林模型上進一步發現ipl TFA對同側ipl福爾馬林致小鼠疼痛模型的Ⅰ、Ⅱ反應有顯著抑制作用，但對對側ipl福爾馬林致小鼠疼痛無明顯影響；而且動脈局部注射TFA 200mg.kg-1可明顯抑制KCl誘發家兔的疼痛反應，此結果說明TFA局部給藥也有明顯的鎮痛作用；另外局部涂敷TFA不僅可顯著抑制二甲苯致小鼠耳片的腫脹，也可顯著降低大鼠肉芽腫的重量，結果表明TFA局部給藥有明顯抗炎作用。

在大腸桿菌和松節油致家兔熱模型上，與阿司匹林一樣，TFA也有一定的解熱作用，提示TFA的鎮痛作用可能類似于解熱鎮痛抗炎藥。

上述藥效學結果表明TFA對口腔粘膜潰瘍有明顯的鎮痛和抗炎作用，并能促進潰瘍愈合。

TFA的一小鼠灌胃igTFA 125、250、500 mg·kg-1 5h內未觀察到一般行為指標發生明顯改變,也未見小鼠自發活動有明顯改變；狗ig 100、200、400 mg·kg-1  TFA 5h內，未見血壓、心率、心律、呼吸頻率及潮氣量明顯變化，100、200、400 mg·kg-1 TFA對狗心電圖（ECG）無明顯不良影響。上述結果表明125、250、500 mg·kg-1 TFA ig對小鼠精神神經系統無明顯的影響；100、200、400 mg·kg-1 TFA ig對狗呼吸系統、心血管系統無明顯不良影響。

二、小鼠急性毒性試驗結果：

小鼠急性毒性作用試驗結果表明小鼠灌胃給藥黃蜀葵花總黃酮 20000 mg.kg-1，2W內未見小鼠出現明顯的毒性反應，也未見死亡，表明黃蜀葵花總黃酮小鼠灌胃給藥LD50大于20000 mg.kg-1；黃蜀葵花總黃酮小鼠腹腔注射1h后，開始出現毒性反應，死亡動物主要發生在用藥后1 — 2d內，死亡動物尸體解剖后，肉眼觀察未見心、肝、腎、腦、肺及胃腸有明顯的病變。小鼠腹腔注射黃蜀葵花總黃酮LD50為2420.3±199.8 mg.kg-1，95%可信區限為2229.1—2627.9 mg.kg-1。

三、大鼠長期毒性試驗結果：

長期毒性試驗結果表明大鼠連續15周(W)的灌胃TFA150、300、600mg.kg-1。實驗給藥期間和停藥恢復觀察期間均未見動物有明顯的中毒癥狀出現，其攝食、體重增長與對照組比較無明顯差異，主要臟器的臟器系數和組織病理學檢查與對照組比較無明顯差異；血液學檢查和血液生化學檢查中只有用藥15W時中劑量組的血紅蛋白（HGB）和大、小劑量組血糖（GLU）有明顯的降低，其它指標無明顯的不利的改變；停藥恢復期觀察僅見有TFA大劑量組的ALT和TCH有明顯的增高，未見其它新的毒性反應的產生。

四、比格狗長期毒性試驗結果：

比格狗連續15 W的灌胃黃蜀葵花總黃酮50、122.5、300mg.kg-1。實驗給藥期間和停藥恢復觀察期間僅見給藥2 — 3 W時高劑量組部分動物有一過性的惡心、嘔吐反應，其它動物無明顯的中毒癥狀出現；黃蜀葵花總黃酮50、122.5、300mg.kg-1對動物的攝食、體重增長、ECG、血液學檢查、血液生化學檢查及主要臟器的臟器系數等指標與無明顯不利的影響；各劑量組的病理組織學檢查結果與對照組之間無顯著差異。研究結果表明比格狗連續15 W的灌胃黃蜀葵花總黃酮50、122.5、300mg.kg-1無明顯的毒性作用，停藥觀察15天也未見新的毒性作用出現。

大鼠和比格狗長期毒性試驗結果除大鼠用藥15W時血糖有明顯的降低和停藥恢復期觀察僅見有TFA大劑量組的ALT和TCH有明顯的增高，未見其它新的毒性反應的產生，因此，建議臨床研究時注意觀察肝功能和血脂的變化；比格狗連續15W用藥無明顯的毒性作用，停藥觀察也未見新的毒性作用出現。

綜上所述，TFA和TFAZ對口腔粘膜潰瘍均有明顯的治療作用，局部給藥有明顯的鎮痛和抗炎作用。TFA一般藥理作用研究表明對小鼠精神神經系統和狗呼吸系統、心血管系統無明顯不良影響；小鼠灌胃給藥LD50大于20000 mg.kg-1；長期毒性試驗研究結果提示臨床研究時注意對肝功能和血脂的變化的觀察。

目前，黃蜀葵花總黃酮原料、膠囊和散劑的臨床批件(中藥注冊分類5)已經獲得，批件號分別為：2004L01553、2004L02840和2004L01554?，F尋求轉讓。

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